ПЦР (полимеразная цепная реакция) тестирование является основной технологией в молекулярной диагностике. Стандартизация процессов упаковки и тестирования напрямую влияет на точность и биобезопасность результатов. Эта статья дает профессиональный взгляд на ключевые точки контроля качества в процессе тестирования ПЦР.
Пример квитанции и предварительная обработка являются первыми шагами в процессе. Лаборатории должны строго проверить идентификацию выборки, условия транспортировки и время хранения, чтобы обеспечить целостность выборки. После получения образцы должны быть пронумерованы и зарегистрированы в шкафу биобезопасности и проходить процедуры обработки до -, такие как лизис и экстракция нуклеиновой кислоты на основе тестового типа. Два - Система проверки человека требуется на этом этапе, чтобы предотвратить перекрестное - загрязнение.
Подготовка системы реакции ПЦР должна выполняться на чистой скамейке. Операторы должны носить защитное оборудование уровня 3 и использовать Nuclease - бесплатные расходные материалы. Подготовка реагентов придерживается принципа «однонаправленный рабочий процесс», перемещающийся из зоны подготовки реагента к зоне обработки образца, а затем к области усиления. Отрицательные контроли, положительные контроли и внутренний контроль должны быть включены в каждую партию реакции для мониторинга экспериментальной достоверности.
Во время фазы усиления и тестирования прибор PCR должен быть предварительно - калиброванные и проверенные параметры цикла температуры. Процедура реакции обычно включает в себя три шага: денатурация (94 - 95 градусов), отжиг (50-65 градусов) и расширение (72 градуса). Количество циклов корректируется на основе цели обнаружения. Флуоресцентная ПЦР в реальном времени также требует мониторинга порога сигнала флуоресценции специфических каналов.
Анализ результатов и отчетность должны выполняться квалифицированными техниками. Необработанные данные должны быть рассмотрены как минимум двумя профессионалами, чтобы подтвердить морфологию кривой усиления, правдоподобие значения КТ и соблюдение материалов контроля качества со стандартами. Окончательный отчет должен включать информацию о методологии испытания, основу для интерпретации результатов и заявление об испытательных ограничениях.
Весь процесс строго придерживается ISO 15189 и соответствующих спецификаций CDC. Система тройной гарантии мониторинга окружающей среды, технического обслуживания оборудования и обучения персонала для обеспечения надежности и отслеживания тестирования ПЦР.